Định lượng kháng thể kháng Insulin bằng kỹ thuật miễn dịch phóng xạ

Định lượng kháng thể kháng Insulin bằng kỹ thuật miễn dịch phóng xạ

NGUYÊN LÝ

Kỹ thuật IRMA cho phép định lượng invitro kháng thể kháng insulin (anti insulin: AnIn) trong huyết thanh hoặc huyết tương người bằng kỹ thuật Sandwich 1 bước. Trong phản ứng AnIn là kháng nguyên (KN) sẽ được gắn đặc hiệu với kháng thể đơn dòng kháng AnIn (KTĐD), phức hợp KH-KT này sẽ được phát hiện bởi kháng kháng thể (KKT) đánh dấu I-125 (tracer).

Kết thúc phản ứng, lượng tracer tự do được loại bỏ bằng gạn hoặc hút và sau đó là ly tâm rửa.

Lượng tracer gắn một cách đặc hiệu với phức hợp AnIn-KTĐD được đo bằng máy đo gamma. So sánh với giá trị chuẩn sẽ tính được nồng độ của AnIn trong mẫu cần định lượng.

CHUẨN BỊ

Người thực hiện

Bác sỹ chuyên ngành Y học hạt nhân

Kỹ thuật viên xét nghiệm RIA

Kỹ sư , kỹ thuật viên vận hành thiết bị đo mẫu 

Cán bộ hóa dược phóng xạ

Phương tiện, hoá chất

Phương tiện

Máy đo Gamma Counter đo ¹²⁵I và xử trí mẫu tự động theo chương trình.

Máy lắc ngang ( 200-350 vòng/phút ,thường dùng 300 vòng/phút ),

Máy trộn.

Máy ly tâm

Bộ pipet chuyên dụng cho xét nghiệm RIA

Một giá cắm bộ micropipet có số hút 100 μl , 200 μl , 1.000 μl và các hộp đựng đầu plastic các loại.

Giá cắm ống nghiệm.

Tủ lạnh bảo quản mẫu

Hoá chất

Bộ kít định lượng kháng thể kháng Insulin, thành phần kit gồm :

KT kháng Insulin của người 

Kháng kháng thể kháng Insulin gắn ¹²⁵I,

Dung dịch đệm

2 túi x 50 ống nghiệm nhựa 

Các mẫu huyết thanh chuẩn với các nồng độ KT kháng Insulin khác nhau

CHỈ ĐỊNH

Chẩn đoán ban đầu các người bệnh tiểu đường.

Tiểu đường không phụ thuộc Insulin.

Tiểu đường kháng thuốc.

CHỐNG CHỈ ĐỊNH:

Không có.

CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

Lấy bệnh phẩm:

Người bệnh cần nhịn ăn sáng,được lấy 1-2 ml máu tĩnh mạch không chống đông. 

Tiến hành kỹ thuật:

Sau khi lấy mẫu máu, huyết thanh được tách bằng phương pháp thông thường. Tiến hành định lượng ngay hoặc bảo quản đến 24h ở 2-8^oC. Thời gian bảo quản lâu hơn nên để ở -20 ^oC, thích hợp hơn là chia đều,tránh làm đông lặp đi lặp lại và tránh làm tan đông. Sau khi làm tan đông, mẫu huyết thanh phải được trộn cẩn thận.

Quy trình định lượng anti Insulin:

Các ống nghiệm được đánh số đầy đủ (chuẩn, huyết thanh kiểm tra, huyết thanh mẫu) như bảng 1.

Nhỏ 200 μl chuẩn hoặc mẫu bằng pipet vào đáy ống nghiệm. Nên sử dụng đầu pipet mới cho mỗi mẫu.

Thêm vào mỗi ống nghiệm 100 μl ¹²⁵I anti anti Insulin.

Các ống nghiệm được lắc trên máy lắc ngang (300 ± 50) vòng/ phút trong 2 h ở 18-25 ^oC.

Thêm vào mỗi ống nghiệm 1 ml đệm rửa, hỗn hợp được gạn hoặc hút và rửa lại bằng 1 ml đệm rửa.

Các ống nghiệm được đo trong 1 phút bằng đầu đo gamma.

NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

Số xung/ phút của mỗi chuẩn riêng biệt được đánh dấu, dựa vào nồng độ kháng thể kháng insulin  tương ứng trên đồ thị đã được dựng chiếu theo đó. Đường cong chuẩn phù hợp nhất được xây dựng qua các điểm này.

Các giá trị đo được của huyết thanh kiểm tra và mẫu được đánh dấu trên đồ thị và nồng độ anti Insulin  được đọc từ đường cong chuẩn.